课程名称：兽医微生物学实验          英文名称：Experimental Course for Veterinary Microbiology

课程总学时：32                              实验学时：32

课程总学分：1

适用专业：动物医学

一、课程性质与任务(100～300字)

兽医微生物学实验是动物医学专业的一门专业必修课，其配合兽医微生物学的理论课教学，注重兽医微生物学基本的实验方法和技能的培养，并紧密结合临床实际运用。实验内容包括微生物学基本实验操作，微生物的分离、培养及鉴定方法。通过实验教学和操作使学生加深对理论知识的理解与运用，掌握微生物学诊断中常用的基本实验手段及技能，培养学生正确记录、处理和分析实验数据，养成实事求是、严肃认真的科学作风和细致整洁的实验习惯，为今后从事兽医学相关工作打下良好的基础。

二、教学目的与要求(600字以内)

1、系统练习和掌握兽医微生物学的基本实验室操作技能；

2、掌握微生物的分离、培养及鉴定方法；

3、能够综合运用微生物学实验方法对特定传染病的诊断进行实验设计。

三、实验项目设置

（一）实验一：细菌的基本形态及染色观察

1、实验类型：验证

2、实验学时数：4

3、实验目的：认识细菌的基本形态和结构

4、实验内容

（1）细菌的形态观察。

（2）细菌的特殊结构观察。

5、实验要求：通过细菌标本片观察，进一步熟悉光学显微镜的使用。

6、实验仪器设备：光学显微镜、细菌标本片。

（二）实验二：细菌抹片的制备及染色，培养基的制备

1、实验类型：验证

2、实验学时数：4

3、实验目的：

（1）掌握细菌抹片的制备方法和几种常用的染色方法。

（2）熟悉一般培养基制备的原则和要求。

4、实验内容：

（1）细菌抹片的制备。

（2）几种常用的染色方法。

（3）普通肉汤培养基和普通琼脂培养基的制作。

5、实验要求

（1）认识革兰氏染色和抗酸染色的反应特性。

（2）熟悉一般培养基制备的过程。

（3）掌握培养基酸碱度的测定。

6、实验仪器设备：酒精灯、显微镜、高压锅、培养箱。

（三）实验三：细菌分离培养及移植、环境中微生物检验

1、实验类型：验证

2、实验学时数：4

3、实验目的：

（1）掌握细菌分离培养的基本要领和方法。

（2）了解自然界中微生物的分布及其重要意义。

4、实验内容：

需氧菌：

（1）划线分离培养法。

（2）纯培养的获得与移植法。

（3）肉汤增菌培养。

（4）穿刺培养。

（5）倾注培养法。

厌氧菌：

（1）焦性没食子酸法。

（2）玻罐或干燥器法。

5、实验要求：掌握需氧菌和厌氧菌培养的原理及其方法。

6、实验仪器设备：酒精灯、显微镜、高压锅、培养箱。

（四）实验四：细菌生化实验（肠杆菌科的鉴别等）

1、实验类型：验证

2、实验学时数：4

3、实验目的：掌握细菌鉴定中常用生化实验的原理和方法。

4、实验内容：

（1）氧化型与发酵型（O/F）的测定。

（2）糖类分解试验。

（3）吲哚（靛基质）试验。

（4）甲基红（MR）试验/VP试验。

（5）枸橼酸盐利用试验。

（6）硫化氢试验。

（7）氧化酶试验。

（8）触酶试验。

（9）脲酶试验。

（10）淀粉水解试验。

（11）石蕊牛乳试验。

（12）硝酸盐还原试验。

（13）苯丙氨酸脱氨酶试验。

（14）氨基酸脱羧酶试验。

（15）胆汁溶解试验。

（16）明胶液化试验。

（17）β-半乳糖苷（ONPG）试验。

5、实验要求：了解细菌生化试验在细菌鉴定及诊断中的重要意义。

6、实验仪器设备：酒精灯、显微镜、培养箱。

（五）实验五：理化因素对细菌的影响（药敏试验等）

1、实验类型：验证

2、实验学时数：4

3、实验目的：

熟悉和掌握圆纸片扩散法检测细菌对抗菌药物敏感性的操作程序和结果判定方法。

4、实验内容：

（1）圆纸片扩散试验。

（2）最低抑菌浓度试验。

5、实验要求：

（1）了解最低抑菌浓度试验的原理和方法。

（2）了解药敏试验在实际生产中的重要意义。

6、实验仪器设备：酒精灯、显微镜、紫外灯、培养箱。

（六）实验六：实验动物接种、剖检

1、实验类型：验证

2、实验学时数：4

3、实验目的：学习实验动物的接种、采血以及剖检的方法。

4、实验内容：

（1）实验动物接种法。

（2）实验动物采血法。

（3）实验动物的尸体剖检法。

5、实验要求：掌握动物实验的基本操作和注意事项。

6、实验仪器设备：注射器、解剖台、高压锅、培养箱。

（七）实验七：病毒鸡胚培养、鸡胚原代细胞培养及病毒的接种

1、实验类型：验证

2、实验学时数：4

3、实验目的：

（1）掌握鸡胚的孵化过程和不同日龄鸡胚的接种途径和接种方法。

（2）掌握鸡胚原代细胞培养操作的基本程序。

（3）了解细胞培养接种的过程。

4、实验内容：

（1）鸡胚的选择和孵化、鸡胚的接种、接种后检查及鸡胚材料的收获。

（2）鸡胚原代细胞培养的配液、取胚和剪碎、洗涤、吹打、细胞计数、稀释、分装培养。

（3）接种病毒和病变观察。

5、实验要求：

（1）掌握新城疫病毒在鸡胚尿囊腔增殖过程，掌握接毒和收毒方法。

（2）观察单层细胞的生长情况。

（3）观察细胞病变情况。

6、实验仪器设备：倒置显微镜、酒精灯、冰箱、高压锅、二氧化碳培养箱。

（八）实验八：新城疫病毒的血凝及血凝抑制试验

1、实验类型：验证

2、实验学时数：4

3、实验目的：掌握HA和HI的基本操作技术。

4、实验内容：

（1）血球凝集试验（HA）

（2）血细胞凝集抑制试验（HI）

5、实验要求：掌握HA和HI的操作方法和实验结果的判断。

6、实验仪器设备：微量移液器、培养箱、微量振荡器。

四、考核方式与方法

五、实验指导教材与参考资料

1. 教材：

姚火春主编，《兽医微生物学实验指导》，中国农业出版社，2009年1月第二版

2. 参考资料：

胡桂学，陈金顶，彭远义主编，《兽医微生物学实验教程》，中国农业大学出版社，2015年1月第二版

陆承平主编，《兽医微生物学》，中国农业出版社，2013年1月第五版

（撰写人：罗永文   审核人： ）